多糖类药物结构确证是药物研发和质量控制的核心环节，其研究内容涵盖从一级结构到高级构象的全面解析。但因其结构复杂，且多为多组分物质，结构确证难度极大，同时也成为CDE发补的重灾区，发补内容示例如下：

　　(1)XXX主要成分为XXX，并含有一定量的蛋白质、脂肪、植酸、淀粉等，请采用适宜的方法(如GC-MS)对主要成分XXX的单糖组成及其连接方式进行确证，并采用UV、IR、拉曼光谱、色谱、质谱、电泳、NMR和热分析等适宜的手段对各成分进行结构确证，同时与参比制剂进行对比研究。

　　(2)请对本品分子量分布进行研究(请提供重均分子量和数均分子量具体检测数据及检测图谱，并计算多分散系数)，并与参比制剂进行对比研究。

　　(3)请对本品聚合度进行研究，并与参比制剂进行对比研究。

　　(4)请明确本品XXX含量，并与参比制剂进行对比研究。

　　(5)建议进行结晶度测定，可使用X射线衍射手段。

多糖药物结构确证研究内容

一、一级结构解析

1. 单糖组成分析

（1）酸水解：三氟乙酸(TFA)或盐酸完全水解多糖为单糖。

（2）色谱技术：

① HPLC/GC-MS：定量各单糖种类及摩尔比(甘露醇为内标)。

② 毛细管电泳(CE)：高分辨率分离单糖。

2. 分子量与分布测定

（1）凝胶渗透色谱(GPC)：基于分子尺寸排阻原理，需已知分子量标准品校准。

（2）多角度激光光散射(MALLS)：绝对分子量测定，无需标准品，可联用GPC。

（3）辅助方法：粘度法、动态光散射(DLS)。

3. 糖苷键连接方式与位置

（1）甲基化分析：

① 全甲基化后水解，GC-MS分析甲基化单糖，推断连接位点(如Cucanu-Kerek法)。

② 红外光谱验证(3500 cm⁻¹无-OH峰表明甲基化完全)。

（2）高碘酸氧化与Smith降解：选择性氧化邻二醇键，确定直链/支链结构。

（3）核磁共振(NMR)：

① 一维(¹H-NMR、¹³C-NMR)：异头碳信号(δ 90–112 ppm)判断糖残基数及构型(α/β)。

② 二维(HSQC、HMBC)：解析糖苷键连接序列及异头碳构型。

4. 糖环形式与取代基分析

（1）红外光谱(IR)：

① 844 cm⁻¹(α-构型)、891 cm⁻¹(β-构型)。

② 1240 cm⁻¹(硫酸基)、1650 cm⁻¹(乙酰基)等特征峰。

（2）化学修饰分析：如乙酰化、硫酸化位点鉴定。

二、高级结构研究

1. 二级结构与分子构象

（1）圆二色谱(CD)：检测螺旋结构(如多糖的右手螺旋)。

（2）原子力显微镜(AFM)：直接观察分子形态、分支及聚集状态。

（3）X射线晶体衍射：适用于可结晶多糖的三维结构解析。

2. 序列与拓扑结构

（1）酶解/化学降解：将多糖片段化，质谱(MS/MS)或NMR分析小片段序列。

（2）质谱技术：

① 串级质谱(MSⁿ)：基于同位素轮廓指纹比对，解析拓扑结构。

② 纳米孔测序与AI辅助：新兴的快速微量分析手段。

常用分析方法对比

　　山东大学淄博生物医药研究院拥有600M核磁共振波谱仪、高分辨质谱仪、液质联用仪、多角度激光散射仪等多糖结构确证的关键仪器，依托山东大学在糖药物领域强大技术支撑，先后承接肝素、环糊精、纤维素、淀粉类及合成多糖如阿卡波糖、磺达肝癸钠等结构确证研究项目近20个品种，在多糖结构确证领域积累了丰富的经验。

　　近期，我院针对多磺酸粘多糖成立了专门攻关小组，结合前期项目经验对该项目结构确证进行了重点攻关，目前已突破关键技术，完成了核磁一维谱和二维谱的测试解析、酶解后二糖分析、寡糖分析、磺酸化程度解析、分子量分布研究等内容，具备了为客户提供专业多磺酸粘多糖结构确证技术服务的能力，欢迎垂询!

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